久久久久久久人妻无码中文字幕爆,亚洲国产精品无码久久久不卡,国产精品自产拍在线观看花钱看,久久精品道一区二区三区,青楼妓女禁脔道具调教sm,少女的视频完整版在线观看,99在线精品免费视频

蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot,WB)常見問題解析

   蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot,WB)分子生物學(xué)、生物化學(xué)免疫遺傳學(xué)中常用的一種實(shí)驗(yàn)方法。其基本原理是通過特異性抗體凝膠電泳處理過的細(xì)胞或生物組織樣品進(jìn)行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中表達(dá)情況的信息。

WB實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常會出現(xiàn)各種問題,得到不完美的結(jié)果。西美杰代理的SeraCare(KPL)品牌做為世界知名免疫學(xué)產(chǎn)品供應(yīng)商擁有近40年的產(chǎn)品研發(fā)經(jīng)驗(yàn),對WB實(shí)驗(yàn)有一定深入的了解,今天就為廣大客戶分享和總結(jié)WB中常見問題和解決辦法。

問題

可能原因

解決辦法

轉(zhuǎn)膜不充分導(dǎo)致信號較弱

膜沒有完全均勻濕透

使用100%甲醇浸透膜

靶蛋白分子量小于10000

選擇小孔徑的膜,縮短轉(zhuǎn)移時間

靶蛋白等電點(diǎn)等于或接近轉(zhuǎn)移緩沖液PH值

嘗試使用其他緩沖液

甲醇濃度過高

降低甲醇濃度或者使用乙醇/異丙醇替代

轉(zhuǎn)移時間不夠

對于厚的膠以及高分子量蛋白質(zhì)需要延長轉(zhuǎn)移時間

洗膜不充分

增加洗液體積和洗滌次數(shù)

阻斷不充分

增加封閉液孵育時間,或者提高溫度。

二抗?jié)舛?/span>過高

降低二抗?jié)舛?/span>

檢測過程中膜干燥

保證充分的反應(yīng)液

曝光過度

縮短曝光時間

抗體與阻斷蛋白有交叉反應(yīng)

檢測抗體與阻斷蛋白的交叉反應(yīng)性,選擇無交叉反應(yīng)的封閉劑。洗滌液中加入Tween-20可減少交叉反應(yīng)

沒有陽性條帶或條帶信號較弱

抗體染色不充分

增加抗體濃度,延長孵育時間

酶活降低甚至失活

直接將酶和底物進(jìn)行混合,如果不顯色則說明酶失活了。選擇在有效期內(nèi),有活性的酶聯(lián)物

標(biāo)本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低

設(shè)置陽性對照,如果陽性對照有結(jié)果,但標(biāo)本沒有則可能是標(biāo)本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低。可考慮增加標(biāo)本上樣量決靶蛋白含量低的原因

試劑不匹配

一抗與組織種屬,一抗與二抗或/和底物與酶系統(tǒng)之間不匹配。通過設(shè)置內(nèi)參照可以驗(yàn)證二級檢測系統(tǒng)的有效性

抗失效

選擇在有效期內(nèi)抗體,并選擇現(xiàn)配現(xiàn)用的工作液

洗膜過度

縮短洗滌時間

HRP抑制劑

所用溶液和容器中避免含有疊氮化鈉

抗體活性降低

選擇在有效期內(nèi)的抗體,工作液現(xiàn)配現(xiàn)用,避免長時間放置

蛋白轉(zhuǎn)移不充分

見上述

封閉過度

減少封閉劑的量或縮短時間,換用不同封閉劑類型

曝光時間過短

延長曝光時間

條帶位置(大小)不對,或有非特異性條帶

二抗的非特異性結(jié)合

增加一個對照:不加一抗,其他操作過程不變,即可驗(yàn)證背景是否由二抗系統(tǒng)來源。選擇其他二抗(特異性更強(qiáng)的,只針對重鏈的)

抗的特異性不夠

使用單克隆或者親和純化的抗體,保證抗體的特異性

蛋白降解

使用新鮮制備的標(biāo)本,并使用蛋白酶抑制劑,實(shí)驗(yàn)中增加內(nèi)參

蛋白二聚體或多聚體存在

增加蛋白質(zhì)變性過程及強(qiáng)度

抗體濃度過高

降低抗體濃度,可以減少非特異性條帶

蛋白上樣量過大

降低樣本上樣量

背景斑駁

封閉劑中有聚集體

使用前過濾封閉劑

HRP耦聯(lián)二抗中有聚集體

過濾二抗試劑,去除聚集體

膜上出現(xiàn)反像

HRP含量過高

降低酶聯(lián)二抗的濃度



西美杰代理的
SeraCare(KPL)品牌是專業(yè)親和純化二抗和底物顯色系統(tǒng)生成商,能為廣大診斷企業(yè)、科研用戶提供600多種二抗,覆蓋20多個物種,18標(biāo)記,具有高純度、特異性強(qiáng)、批間穩(wěn)定等特點(diǎn),產(chǎn)品經(jīng)過ISO90001質(zhì)量體系認(rèn)證。


 

如果您要咨詢抗、二抗、底物、輔助試劑等免疫相關(guān)產(chǎn)品信息,歡迎隨時撥打SeraCare(KPL)中國代理北京西美杰科技有限公司客服熱線400-050-4006或登錄官網(wǎng)www.bzldj.cn查詢訂購。

在線客服
镇宁| 个旧市| 谢通门县| 淮滨县| 朔州市| 大冶市| 姜堰市| 莱芜市| 张家港市| 肥城市| 包头市| 凤阳县| 霍林郭勒市| 永丰县| 绥化市| 武陟县| 双城市| 垫江县| 建宁县| 梓潼县| 崇左市| 和平县| 子洲县| 和静县| 成都市| 普安县| 双峰县| 当雄县| 呼和浩特市| 肇庆市| 屏南县| 富锦市| 屯留县| 阳高县| 红安县| 岗巴县| 大同县| 云安县| 松江区| 中西区| 蓬安县|